Isolamento de Toxoplasma gondii a partir de cérebro e músculo de gatos serologicamente positivos utilizando culturas celulares

Abstract

O isolamento de Toxoplasma gondii é imprescindível quer para efeitos de diagnóstico definitivo da infecção, quer para estudos visando a genotipagem de estirpes circulantes, tanto nos animais como no ser humano. O bioensaio é presentemente considerado o método de eleição para isolamento de T. gondii de amostras biológicas, no entanto, para além de eticamente questionável, a inoculação em ratinho é dispendiosa e laboriosa. O ensaio in vitro utilizando culturas celulares é frequentemente mencionado como alternativa, contudo o investimento nesta área tem sido diminuto, sendo raros os trabalhos que referem o recurso a este método para isolamento de T. gondii a partir de tecidos animais. Este estudo teve como objectivo testar diferentes métodos de isolamento de T. gondii em culturas de células. Para a preparação dos inóculos, colhemos amostras de tecido cerebral e muscular (coração e membros) de 16 gatos serologicamente positivos, durante a necrópsia. O tecido cerebral foi homogeneizado com agulha e seringa em meio de cultura e o tecido muscular digerido numa solução de ácido clorídrico e pepsina. A inoculação dos homogeneizados de cérebro e músculo em culturas de células Vero resultou, respectivamente, numa taxa de isolamento de 37,5% (6/16) e 62,5% (10/16). A visualização microscópica de taquizoítos nas culturas celulares foi possível 5-14 dias pós-inoculação, utilizando homogeneizados de cérebro e 7-32 dias pós-inoculação, utilizando homogeneizados de tecido muscular. Todos os isolados foram confirmados por n-PCR visando a região ITS1 do rDNA de T. gondii.