Proteção da oliveira contra vírus utilizando OMMV como vetor de silenciamento

Abstract

O silenciamento de genes induzido por v rus (Virus induced gene silencing - VIGS) permite o silenciamento espec fico de genes que podem ser inseridos, total ou parcialmente, num vetor viral que de seguida inoculado em plantas. Estas plantas, ir o reconhecer a sequ ncia introduzida como estranha, destruindo-a. Adicionalmente, os mecanismos de defesa da planta ficam a reconhecer todas essas sequ ncias de RNA hom logo existente na planta. V rios v rus de plantas t m sido usados como vetores VIGS, no entanto, a sua dif cil manipula o e o seu n mero reduzido de hospedeiros, limita o seu uso. O Alphanecrovirus Olive mild mosaic virus (OMMV), isolado de oliveira, tem caracter sticas que o colocam como um vetor muito promissor. O seu pequeno genoma facilita a sua manipula o e o vasto leque de hospedeiros permite a sua aplica o a um elevado n mero de plantas incluindo a oliveira. Um vetor baseado em OMMV foi desenvolvido no mbito do projeto TOMVIRPROTECT. Um clone infeccioso de OMMV (pUC_OMMVFL5) foi modificado para obter uma estirpe assintom tica. Uma nica muta o no nt18 (C para A) da prote na de movimento p6, uma prote na supressora de silenciamento, originou um cod o STOP, resultando no knockout do gene. O OMMVp6 mutante foi de seguida manipulado para transportar o gene rep rter GFP, e inoculado em plantas de Nicotiana benthamiana 16C onde n o causou sintomas vis veis e onde a acumula o viral foi id ntica de OMMV ‘wild type’. A acumula o relativa de RNAm de GFP em plantas 16C foi a mais baixa quando a GFP foi colocada na dire o antisense e na extremidade 3’ do OMMVp6 mutante. Foi ainda inserido um local de restri o m ltiplo nesta regi o para facilitar a introdu o de sequ ncias de genes a serem silenciados. Estas transforma es permitiram obter um vetor de OMMV-VIGS, que se pretende que fique dispon vel para controlo de doen as virais em oliveira e tamb m noutras plantas.