Cryopreservation of sheep embryos produced in vitro: the effect of protocols of lipid reduction

Abstract

A produção in vitro de embriões ovinos e respectiva criopreservação são biotecnologias reprodutivas em desenvolvimento que ainda não atingiram os resultados esperados para serem aplicados rotineiramente, sobretudo pela menor criotolerância destes embriões quando comparados com os produzidos in vivo. Realizaram-se uma série de experiências procurando métodos alternativos de produção e criopreservação deste tipo de embriões. Concluiu-se que a fertilização in vitro com sémen fresco de carneiro aumenta a qualidade dos embriões produzidos quando conjugada com meio contendo piruvato e FSH. Também se concluiu que é possível aplicar com sucesso protocolos de redução lipídica usando uma combinação de citocalasina D com centrifugação ou adicionando o isómero conjugado trans-10 cis-12 do ácido linoleico (CLA) ao meio de cultura, responsáveis pelo aumento da criotolerância dos embriões e maiores taxas de produção. Adicionalmente descreveram-se as características ultraestruturais dos embriões ovinos produzidos in vitro e dos produzidos em presença de CLA, quer frescos quer congelados; ABSTRACT: In vitro production of sheep embryos and cryopreservation are developing reproductive technologies that haven’t reached yet the expected results for routine application, mainly by the reduced cryotolerance when compared to in vivo derived ones. A series of experiments were developed searching for alternative methods of production and cryopreservation of this source of embryos. It was concluded that in vitro fertilization with fresh ram semen improves quality of in vitro produced sheep embryos when conjugated with a medium containing pyruvate and FSH. Also different protocols of lipid reduction can be successfully applied, when using a combination of cytochalasin D and centrifugation or by adding trans-10 cis-12 conjugated linoleic acid isomer (CLA) in culture, as they increased cryotolerance of embryos and also the production rates. In addition it was described the ultrastructural characteristics of in vitro produced sheep embryos and those cultured in the presence of CLA, either fresh or cryopreserved.