Caracterização molecular de genes de parasitismo do nematode da madeira do pinheiro, Bursaphelenchus xylophilus, em interação com o hospedeiro.

Abstract

O nemátode da madeira do pinheiro (NMP), Bursaphelenchus xylophilus, é um agente patogénico que causa graves danos a várias espécies de coníferas (em Portugal, pinheiro-bravo), tendo um grande impacto na indústria madeireira e nos ecossistemas florestais. Estudos anteriores do transcriptoma do NMP permitiram identificar genes que estão significativamente expressos durante a infeção do hospedeiro, entre os quais estão genes que codificam proteínas com domínio de taumatina. O objetivo principal deste estudo foi a caracterização molecular deste grupo de genes e compreender de que forma poder o participar no parasitismo do NMP. Para atingir os objetivos espec ficos, foram realizadas várias técnicas de biologia molecular tais como o PCR convencional, RT-PCR e o SQ-RTPCR, clonagem, eletroforese em gel e sequenciação direta. O estudo funcional dos genes candidatos foi realizado atrav s dos ensaios de stress oxidativo e hibridação in situ. A amplificação dos genes a partir de gDNA validou três genes no genoma do NMP – BXY0122100, BXY0431000 e BXY431400. Os genes codificam três proteínas com domínio funcional pertencente à familia das taumatinas (IPR037176). A clonagem e sequenciação do gene candidato mais interessante - BXY0122100 - confirmou a sequ ncia predita. A localização destes genes no corpo do NMP mostra que BXY0431400 apresentou, possível, expressão no intestino. O NMP sobrevive após 24h de exposição ao agente oxidante H2O2 (a 15mM e a 30mM), havendo alteração da expressão dos três genes comparativamente ao controlo. Com este trabalho, concluiu-se que algumas taumatinas são expressas em diferentes tecidos do NMP o que poder indicar diferentes funções. No geral, as taumatinas podem estar relacionadas com a metabolização de compostos de stress oxidativo e estar envolvidos na interação com a planta hospedeira.