Caracterização molecular seletiva de estrongilideos gastrointestinais em pequenos ruminantes

Abstract

A presente dissertação tem como principal objetivo o desenvolvimento de técnicas moleculares para a identificação de formas exógenas de estrongilídeos gastrointestinais (EGI), parasitas de pequenos ruminantes, de forma a conhecer a diversidade de EGI presente numa determinada população. Testaram-se técnicas moleculares de identificação a partir de ovos, larvas L3 e adultos de EGI, através da extração de DNAg por diferentes kits comerciais (DNeasy Blood & Tissue (Qiagen®), Powersoil (Qiagen®) e Chelex (Biorad®)). Todos os kits/protocolos permitiram extrair o DNAg, sendo possível amplificar uma porção do gene rRNA Internal transcriber spacer (ITS1) por cPCR e qPCR. Foi possível extrair com sucesso DNAg de amostras de fezes calcadas e secas, em papel de filtro comercial, o que traz vantagens ao transporte e biossegurança das amostras. Com este trabalho foi possível seguir os primeiros passos para a implementação de um diagnóstico destes parasitas por identificação molecular numa amostra biológica. - Selective molecular characterisation of gastrointestinal strongylids in small ruminants - Abstract:The present dissertation primarily aims at a selective molecular characterization of gastrointestinal strongyles (GIS) parasites in small ruminants, allowing the identification of the diversity of GIS present in a given population. During this work, different molecular techniques were used to identify the distinct exogenous parasitic genera present in faeces, L3 larvae, and adult GIS, using commercial kits for total gDNA extraction (DNeasy Blood & Tissue (Qiagen®), Powersoil (Qiagen®), and Chelex (Biorad®)). All the kits/protocols were able to extract DNA from the different sample-type and it was possible to amplify a portion of the rRNA Internal Transcribed Spacer (ITS1) gene by cPCR and qPCR. Additionally, it was possible to successfully extract gDNA directly from dried faeces samples pressed against commercial filter paper, which may bring advantages for stool transport and samples biosecurity. With this we were able to constitute the basics for a diagnostic technique implementation to identify these parasites in a biological sample.