Um β-mercaptoetanol elisa para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC)

Abstract

Vários melhoramentos na realização do teste de aglutinação direta, que incluem a incorporação de β-mercaptoetanol (β-ME) no tratamento do antigénio e ureia no diluente sérico, contribuíram para aumentar a sua sensibilidade e a especificidade. O objetivo deste estudo foi desenvolver um teste similar (utilizando promastigotes intactos e tratados com β-ME) para o diagnóstico da LVC. Quiçá uma ferramenta deste calibre, para além de constituir um instrumento de suporte serológico ao DAT, permita também um diagnóstico precoce, que possibilite um tratamento rápido, menos tóxico, mais barato e, sobretudo, mais eficaz. Foram realizados testes ELISA e DAT, com os seguintes antigénios de Leishmania donovani (Estirpe MHOM/PT/01/IMT387 cultivada em LIT/Hemin, tratada com β-ME e processada na CDI/LEISH/ICAAM (UE-Évora, Portugal); Estirpe MHOM/SD/68/1-S, cultivada em LIT/Hemin, tratada com tripsina). Os testes ELISA (TRYP-ELISA e β-ME-ELISA) foram realizados de acordo com Voller et al., 1980. A concentração antigénica óptima calculada foi de 2,5 X 106 promastigotes ml-1; o conjugado utilizado foi coelho/anti-cão/ IgG/ PO; o substrato utilizado foi 5-ácido aminosalicílico; os valores de “cut-off” da densidade ótica calculados foram, respectivamente de 0,44 e 0,26. O β-ME-ELISA APRESENTOU MELHORES ÍNDICES DE SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE DO QUE O TRYP-ELISA. β-ME-ELISA OBTEVE MELHORES VALORES DE CONCORDÂNCIA E CORRELAÇÃO COM O DAT DO QUE O TRYP-ELISA. O β-ME-ELISA É UM TESTE DE TRIAGEM PROMISSOR PARA O DIAGNÓSTICO DA LVC, QUIÇÁ TAMBÉM EM ANIMAIS ASSINTOMÁTICOS. A REATIVIDADE DOS DOIS ANTIGÉNIOS MANTEVE-SE ESTÁVEL AO LONGO DE DOIS MESES.