Validação de genes relacionados com o parasitismo do nemátode da madeira do pinheiro, Bursaphelenchus xylophilus, através de hibridação in situ.

Abstract

O nemátode da madeira do pinheiro (NMP), Bursaphelenchus xylophilus, é um endoparasita migratório responsável pela doença da murchidão do pinheiro (DMP) que tem impacto na biodiversidade e economia do sistema florestal. Durante a interação com o seu hospedeiro, o NMP secreta diferentes tipos de proteínas, expressas na sua maioria nas glândulas esofágicas, que o ajudam na migração, supressão das defesas e manipulam da planta para o seu benefício. Com base num estudo anterior do transcriptoma das glândulas esofágicas, foram selecionados seis genes abundantemente expressos nestes tecidos. Neste trabalho pretende-se analisar, caracterizar preditivamente e validar um conjunto de potenciais genes envolvidos no parasitismo, utilizando várias técnicas de biologia molecular (amplificação por reação em cadeia de polimerase (PCR), eletroforese em gel de agarose e amplificação por reação em cadeira de polimerase com transcrição reversa quantitativa (RT-PCR)). Para compreender a sua possível função no parasitismo localizou-se a expressão dos genes candidatos nos tecidos do NMP, utilizado uma técnica de hibridação in situ. Os seis genes candidatos foram validados no genoma e transcriptoma do NMP. Todas as proteínas codificadas têm a presença de um sinal peptídico no N-terminal que indica que, possivelmente, serão secretadas no hospedeiro. Os domínios das proteínas foram identificados como proteases aspárticas A1 (BUX_00713_957 e BUX_01281_82), endoglucanase (BUX_00397_6) e alfa amílase (BUX_00422_152). Para os genes BUX_00713_957, BUX_01281_82, BUX_00422_33, gene BUX_00422_152 foi possível detetar o sinal da sua expressão no intestino. Para o gene BUX_00397_6 (glicosil hidrolase família GH45) foi detetado um sinal nas glândulas esofágicas onde possivelmente é secretado pelo estilete e, uma vez no hospedeiro, terá a função de degradar a parede celular. Para o gene BUX_00351_434 não foi possível caracterizar-se o seu domínio proteico nem confirmar o tecido onde é expresso. Esta proteína pode ser específica deste nemátode e desempenhar um papel crucial no parasitismo. Neste sentido, a análise destas proteínas de parasitismo é importante para compreender a sua função na interação parasita-hospedeiro.