Caracterização de um isolado viral de Olea europaea L., produção de anticorpos policlonais específicos, e aplicação de métodos de diagnóstico

Abstract

Os estudos aqui descritos, realizados sobre o isolado vira) GP, de oliveira, permitiram caracterizá-lo e identificá-lo como um isolado de Tobacco necrosis viras (TNV). O vírus foi propagado em plantas de Nicotiana benthamiana e, subsequentemente, purificado por três métodos diferentes sendo o mais eficaz, o que incluiu uma fase de precipitação com polietileno glicol. As preparações virais revelaram, através de análises apropriadas, morfologia isométrica, com diâmetro de 30 rim, cápside proteica e genoma constituídos, respectivamente, por um péptido de cerca de 30 KDa e por RNA de cadeia simples com 3800 Kb. Em hospedeiros herbáceos infectados com GP, observaram-se três espécies replicativas de RNA, com 2,6x106 Da; 1,05x106 Da e 0,94x106 Da. As preparações de GP reagiram positivamente em testes ELISA (enzyme linkedimmunosorbent assay), com antisoro (comercial) para TNV. O conjunto destas propriedades demonstram que GP é um isolado de TNV. Para efeitos de diagnóstico, produziu-se um antisoro policlonal específico ípara GP e optimizaram-se todos os parâmetros para aplicação na detecção viral, por ELISA. A aplicação comparativa de três métodos de diagnóstico viral, a tecidos de oliveiras infectadas, não foram conclusivos, tornando-se necessário adaptá-los melhor à natureza específica deste material lenhoso. /*** Abstract - Studies here described on a viral isolate obtained from olive, GP, allowed its characterization and identification as Tobacco necrosis virus (TNV) Virus was propagated in Nicotiana benthamiana plants and purified through three different methods, the best of which involved a precipitation step with polyethylene glycol. Further analysis of virus preparations revealed an isometric morphology with 30 nm in diameter, a coat protein and genome made up, respectively, of a peptide with 30 KDa and a single strand RNA molecule with 3800 Kb. In GP-infected herbaceous hosts, three replicative RNA species with 2.6x106 Da; 1.05x106 Da e 0.94x106 Da were observed. Viral GP preparations reacted positively, in ELISA (enzyme linked-immunosorbent assay), with a specific (commercial) ante-TNV. Ali these properties show that GP is a TNV isolate. For diagnoses purposes a specific polyclonal GP antiserum was produced, conditions for ELISA tests were optimised and applications to plant material were carried out. Comparative application of three different virus diagnostic methods to olive plant tissues, were not conclusive regarding their efficacy, and more work is needed to adapt them to the specific nature of this woody material.