Herpesvirus dos Equinos: Isolamento de uma estirpe de EHV-1 não neuropatogénica

Abstract

Os Herpesvirus 1 e 4 dos equinos (EHV-1 e EHV-4) estão associados a várias patologias, incluindo rinopneumonia, abortos e ocasionalmente mieloencefalopatias. Estes dois vírus são enzoóticos na população de equinos como o demonstram as elevadas taxas de seropositividade. A imunidade resultante da infecção é de curta duração e os animais convalescentes são susceptíveis a reinfecção após alguns meses. O diagnóstico diferencial de EHV-1 e EHV-4 só é possível com o auxílio de testes laboratoriais. Embora a seroprevalência a herpesvírus seja elevada nos equinos nacionais, tanto quanto sabemos, estes vírus nunca foram isolados no país. No presente trabalho descreve-se o isolamento e identificação de um EHV-1 após o aborto de uma égua. Isolamento do EHV-1: Inocularam-se culturas celulares RK13 e MDBK com uma suspensão de células mononucleadas do sangue da égua e homogeneizados de pulmão, fígado e baço do feto abortado. As culturas foram mantidas a 37ºC e 5% CO2 até ao aparecimento do efeito citopático (CPE). Detecção do EHV-1 por PCR: O DNA extraído do sangue da égua e dos homogeneizados de órgãos do feto foi utilizado para a amplificação parcial por PCR das ORFs 16, 30 e 68 do EHV-1. As sequências nucleotídicas dos fragmentos obtidos foram determinadas e comparadas com as sequências de herpesvirus dos equinos disponíveis no GenBank. Exames serológicos: Colheram-se três amostras de sangue da égua suspeita, a primeira após ter abortado e as seguintes 15 e 35 dias mais tarde. Os soros foram testados para anticorpos EHV-1/4 com um kit ELISA comercial (Ingenasa). A titulação de anticorpos neutralizantes foi efectuada pelo método standard (OIE) de seroneutralização, utilizando-se diluições seriadas dos soros e 100 TCID50 de EHV-1. O título neutralizante dos soros foi calculado pelo método de Spearman-Kaber. Resultados: Os testes serológicos demonstraram uma clara seroconversão ao EHV-1, com os títulos de anticorpos neutralizantes a subirem mais de 4 log2 entre a primeira colheita de sangue e as colheitas subsequentes. Nas culturas de células o CPE ocorreu após cinco dias de incubação, observando-se células multinucleadas, refringentes e com numerosos vacúolos. As amostras de DNA obtidas do sangue, macerado fetal e cultura de células com CPE, testadas por PCR foram positivas a EHV-1 mas negativas a EHV-4. A especificidade dos fragmentos EHV-1 amplificados por PCR foi confirmada por sequenciação. A presença de uma asparagina na posição 752 da polimerase de DNA, sugere que o vírus isolado seja uma estirpe de EHV-1 não neuropatogénica.